Ποια είναι η αποτελεσματικότητα της ανάλυσης RT-PCR για την ανίχνευση του SARS-CoV-2 στο ανθρώπινο σπέρμα;

Το ξέσπασμα του οξέος αναπνευστικού συνδρόμου της πανδημίας του κοροναϊού 2 (SARS-CoV-2) έχει επισημάνει τις ανησυχίες σχετικά με τα δείγματα σπέρματος για κρυοτραπεζική.

Μελέτη: επικύρωση της μεθόδου RT-PCR SARS-CoV-2: απαίτηση για την αξιολόγηση της ιικής μόλυνσης στο ανθρώπινο σπέρμα. Πίστωση εικόνας: Leonidovich/Shutterstock

Ο SARS-CoV-2 χρησιμοποιεί το ένζυμο μετατροπής της αγγειοτενσίνης 2 του υποδοχέα ξενιστή (ACE2) και κυτταρικούς συμπαράγοντες όπως το TMPRSS2 για να εισέλθει στα κύτταρα στόχους. Η παροδική ιαιμία κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από SARS-CoV-2 και η έκφραση των TMPRSS2 και ACE2 στους όρχεις και σε άλλους βοηθητικούς αδένες μπορεί να οδηγήσει σε απόρριψη του SARS-CoV-2 στην ανδρική γεννητική οδό.

Ιστορικό

Αν και η αντιγραφή του SARS-CoV-2 δεν συμβαίνει κυρίως στην ανδρική αναπαραγωγική οδό, ορισμένα συγκεκριμένα αρσενικά κύτταρα μπορούν να λειτουργήσουν ως ιικές δεξαμενές μετά από συστηματική μόλυνση SARS-CoV-2.

Επιπλέον, τα δείγματα σπέρματος μπορεί να μολυνθούν με SARS-CoV-2 κατά τη συλλογή σπέρματος. Η πιθανότητα του SARS-CoV-2 σε δείγματα κατεψυγμένου σπέρματος προκαλεί ανησυχία για ασθενείς που υποβάλλονται σε τεχνολογία υποβοηθούμενης αναπαραγωγής (ART) και διατήρηση της γονιμότητας.

Προηγουμένως, τέσσερις μελέτες είχαν δείξει την παρουσία του γονιδιώματος SARS-CoV-2 σε δείγματα σπέρματος. Τρεις από αυτές τις μελέτες χρησιμοποίησαν εμπορικές μεθόδους αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφής (RT-PCR) για την αξιολόγηση δειγμάτων σπέρματος, ενώ μία δεν περιέγραψε τον μηχανισμό ανίχνευσης του ιού.

Ωστόσο, αυτές οι μελέτες περιελάμβαναν έναν μικρό πληθυσμό και δεν περιλάμβαναν έγκυρη μέθοδο για την ανίχνευση του SARS-CoV-2 σε δείγματα σπέρματος. Επιπλέον, οι περισσότερες μελέτες χρησιμοποίησαν εμπορικές μεθόδους RT-PCR που επικυρώθηκαν μόνο για αναπνευστικά δείγματα και στόχευαν μόνο δύο ή τρία ιικά γονίδια.

Τρεις μελέτες χρησιμοποίησαν ψηφιακή σταγονοειδή PCR (dd-PCR) για την ανίχνευση φρεατίων σε όλο το γονιδίωμα του SARS-CoV-2. Ωστόσο, ο τύπος του δείγματος ήταν κυρίως μη σπερματικός και για αυτή τη διαδικασία. Θα πρέπει να πραγματοποιείται επιβεβαίωση του ορίου ανίχνευσης (LOD) για δείγματα σπέρματος σε τέτοιες μελέτες.

Μια άλλη μελέτη χρησιμοποίησε το «Τεστ σπέρματος Covid» για να ανιχνεύσει το γονιδίωμα του SARS-CoV-2 σε δείγματα αναπνευστικού και όχι σε δείγματα σπέρματος.

Μια νέα μελέτη στο Αναπαραγωγική βιοϊατρική στο διαδίκτυο Ο στόχος αυτού του περιοδικού ήταν η ανάπτυξη ενός τυποποιημένου πρωτοκόλλου για την ανίχνευση του RNA του SARS-CoV-2 σε τομές σπερματικού υγρού που χρησιμοποιούνται για την ART. Αυτό περιελάμβανε μια δοκιμασία RT-PCR υψηλής απόδοσης που χρησιμοποίησε κατεψυγμένα δείγματα σπέρματος και σπερματικού υγρού για την ανίχνευση RNA του SARS-CoV-2. Επιπλέον, προσδιόρισε επίσης την αποτελεσματικότητα της μεθόδου με βάση τα διαφορετικά χαρακτηριστικά του σπέρματος.

Σχετικά με τη μελέτη

Η μελέτη περιελάμβανε τη συλλογή δειγμάτων σπέρματος από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ανάλυση σπέρματος ρουτίνας για υπογονιμότητα μεταξύ Ιουλίου 2020 και Μαρτίου 2021, ανεξάρτητα από κλινικά κριτήρια, δείκτη μάζας σώματος ή ηλικία. Κανένας από τους ασθενείς δεν ανέφερε πυρετό ή άλλα συμπτώματα SARS. -CoV-2. Ανέφεραν επίσης ότι δεν είχαν εκτεθεί σε κανέναν με συμπτώματα SARS-CoV-2. Μετά από αυτό, πραγματοποιήθηκαν αναλύσεις ρουτίνας σπέρματος, ανίχνευση λευκοκυττάρων και αξιολόγηση ή μορφολογία και στη συνέχεια παρασκευάστηκαν τα δείγματα.

Τα δείγματα νορμοσπέρματος αποψύχθηκαν στους 4°C και συλλέχθηκαν για αναλυτικές δοκιμές. Το RNA εξήχθη από 160 μL κάθε δείγματος, ακολουθούμενο από ενίσχυση του γονιδιώματος SARS-CoV-2 και αναλυτική επιβεβαίωση της δοκιμασίας SARS-CoV-2 RT-PCR. Η επίδραση της ποιότητας του σπέρματος αναλύθηκε με βάση την αποτελεσματικότητα της RT-PCR. Τέλος, πραγματοποιήθηκαν δοκιμές ακριβείας και LOD και ορίου ποσοτικού προσδιορισμού (LOQ) για τον προσδιορισμό SARS-CoV-2 RT-PCR.

ευρήματα

Τα αποτελέσματα ανέφεραν ότι οι ακριβείς αναλύσεις πληρούσαν την αναμενόμενη απαίτηση για τύπους σπέρματος με υψηλές συγκεντρώσεις RNA SARS-CoV-2, για ιικούς στόχους N και ORF1ab και για τύπους σπέρματος με χαμηλές συγκεντρώσεις RNA SARS-CoV-2. Επιπλέον, το γονίδιο S αναφέρθηκε ως ο λιγότερο ευαίσθητος ιικός στόχος στην ανάλυση, ενώ το γονίδιο Ν ήταν ο πιο ευαίσθητος στόχος.

Παρατηρήθηκε ότι τα περιβάλλοντα προστασίας από το κρύο και τα χαρακτηριστικά του σπέρματος δεν επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα της μεθόδου ανίχνευσης. Αναφέρθηκε LOD 0,33 αντιγράφων γονιδιώματος SARS-CoV-2/μL δείγματος για το σπέρμα και 0,23 αντιγράφων γονιδιώματος SARSCoV-2/μL για το σπέρμα. Τέλος, το LOQ δηλώθηκε ως ένα αντίγραφο ιικού γονιδιώματος ανά μικρολίτρο δείγματος.

Επομένως, αυτή η μελέτη μπορεί να προσδιορίσει την παρουσία του RNA του SARS-CoV-2 σε κατεψυγμένο σπέρμα και σπερματικό υγρό. Αυτή η μέθοδος ήταν αποτελεσματική ανεξάρτητα από τα χαρακτηριστικά του σπέρματος και τον τύπο του σπέρματος. Ως εκ τούτου, αυτή η μέθοδος μπορεί να διασφαλίσει την ασφάλεια των δωρητών σπέρματος και των ασθενών που υποβάλλονται σε τεχνικές διατήρησης της γονιμότητας κατά τη διάρκεια της πανδημίας SARS-CoV-2.

Leave a Comment